麥類殼多胞斑點病菌PCR試劑盒

品牌：紀寧生物

貨號：JN32240

規(guī)格： 50次

聯(lián)系方式：021-54721350

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產(chǎn)品詳情

麥類殼多胞斑點病菌PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點：
麥類殼多胞斑點病菌寄主包括小麥、大麥、黑麥、燕麥及早熟禾和翦股穎屬等，對寄主危害大，造成受害植株穗粒數(shù)減少，籽粒皺縮，出粉率降低，能引起高達 53%的減產(chǎn)。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)檢測麥類殼多胞斑點病菌的試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增麥類殼多胞斑點病菌，與其他病原沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：

成份	N+2 個樣品管	PCR 陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
麥類殼多胞斑點病菌PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 陰性對照（水）	--	18μL	--
PCR 陽性對照（麥類殼多胞斑點病菌PCR陽性對照1000倍稀釋液）	--	--	18μL

運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品DNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 麥類殼多胞斑點病菌 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應（40μL 體系）：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個樣品管	PCR 陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
麥類殼多胞斑點病菌PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 陰性對照（水）	--	18μL	--
PCR 陽性對照（麥類殼多胞斑點病菌PCR陽性對照1000倍稀釋液）	--	--	18μL

4. 按下表設置 PCR 反應：

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR 反應35 個循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。

PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。

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