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我國(guó)飼料行業(yè)迅猛發(fā)展，飼料及原料被霉菌污染的情況日漸越發(fā)被重視。飼料及原料發(fā)生霉變后不僅其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值降低，而且被霉菌污染后會(huì)產(chǎn)生霉菌毒素。這種毒素不僅能使畜禽生產(chǎn)性能、繁殖性能下降，而且會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫機(jī)能下降，使畜禽和人類中毒、死亡，直接危害畜禽和人類健康，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失［1］。
防霉劑能抑制霉菌生長(zhǎng)、繁殖，防止其產(chǎn)生霉菌毒素，保證飼料及原料品質(zhì)和延長(zhǎng)貯存時(shí)間。一般飼料及原料中含水量超12%時(shí)，使用防霉劑效果比較明顯。山梨酸鉀是國(guó)際糧農(nóng)組織和衛(wèi)生組織推薦的高效安全的防霉保鮮劑，廣泛應(yīng)用于食品、飲料、化妝品、飼料等行業(yè)。其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、易溶于水，屬于酸性防霉劑，但對(duì)兼性厭氧和絕對(duì)厭氧的乳酸菌等幾乎無影響［2］。在中性或者堿性條件下抑制效果明顯變差，這個(gè)主要取決于其解離出來在酸分子變少，影響其抑制效果，因此也限制了它的一些應(yīng)用范圍［3］。
乳酸菌做為微生態(tài)制劑的常用菌種之一，同時(shí)也是發(fā)酵飼料的常用菌種，具有廣闊的發(fā)展和應(yīng)用前景。但是在加工微生態(tài)制劑和生產(chǎn)發(fā)酵飼料過程中也經(jīng)常會(huì)遇到被霉菌污染的情況，如何保持乳酸菌的活性，抑制霉菌的繁殖是我們一直比較關(guān)注的問題。本文主要研究山梨酸鉀不同添加濃度對(duì)乳酸菌活性的影響。通過研究發(fā)現(xiàn)，0.2%山梨酸鉀對(duì)乳酸菌活性影響較小，且具有比較明顯的抑制霉菌效果。
1.1菌種
乳酸菌：屎腸球菌HEW-A511；霉菌HEW-M1由北京好實(shí)沃生物技術(shù)有限公司提供。
1.2培養(yǎng)基及材料
培養(yǎng)基：MRS肉湯培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司，MRS固體培養(yǎng)基購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司。
材料：山梨酸鉀購自寧波王龍科技股份有限公司。
1.3實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1 山梨酸鉀對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)及活性的影響
將屎腸球菌HEW-A511甘油菌在MRS固體平板進(jìn)行劃線活化，37℃培養(yǎng)36h長(zhǎng)出單斑，將單斑接入50mlMRS肉湯培養(yǎng)基中，37℃ 160rpm培養(yǎng)12h制備種子液。取1ml以上種子液接入到100ml添加不同濃度山梨酸鉀的MRS肉湯培養(yǎng)基中，山梨酸鉀濃度為0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%，初始pH=6.8，37℃ 160rpm培養(yǎng)12h，用0.5ml菌懸液稀釋10-7次方，稀釋液用0.85%的生理鹽水，取1ml稀釋后的菌懸液用MRS固體培養(yǎng)基檢測(cè)乳酸菌活性，37℃培養(yǎng)36小時(shí)后計(jì)數(shù)。
1.3.2山梨酸鉀對(duì)霉菌的影響
將霉菌HEW-M1甘油菌孢子菌懸液0.1ml接入到50ml馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，28℃ 200rpm培養(yǎng)12h，用0.5ml菌懸液稀釋10-6次方，稀釋液用0.85%的生理鹽水，取1ml稀釋后的菌懸液用含有不同濃度的山梨酸鉀孟加拉紅培養(yǎng)基檢測(cè)霉菌活性，山梨酸鉀添加濃度為0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%，28℃培養(yǎng)72小時(shí)后計(jì)數(shù)。
2.1 山梨酸鉀對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)及活性的影響
將不同濃度的山梨酸鉀添加到MRS肉湯培養(yǎng)基中，37℃ 160rpm培養(yǎng)12h后其培養(yǎng)基的pH值出現(xiàn)差異，乳酸菌活性也出現(xiàn)微小差異，具體結(jié)果見表1。
表1 不同濃度山梨酸鉀對(duì)乳酸菌的影響
從表中可以看出添加山梨酸鉀的濃度越高，其培養(yǎng)基的pH值也越高，對(duì)乳酸菌的活性也有小范圍影響。
2.2山梨酸鉀對(duì)霉菌的影響
使用含有不同濃度山梨酸鉀的孟加拉紅培養(yǎng)基培養(yǎng)霉菌，發(fā)現(xiàn)其對(duì)霉菌的抑制效果明顯，具體結(jié)果見表2。
表2 不同濃度山梨酸鉀對(duì)霉菌的影響
山梨酸鉀對(duì)霉菌的抑制作用與其解離的酸分子多少有很大關(guān)系，山梨酸鉀濃度越高解離出來的酸分子越多，對(duì)霉菌的抑制效果越明顯。
2.4討論
山梨酸鉀的抑霉機(jī)理與山梨酸相同，主要是通過解離出來的酸分子與微生物酶系統(tǒng)的巰基結(jié)合從而破壞許多酶系統(tǒng)的作用。山梨酸鉀添加對(duì)乳酸菌的影響隨著濃度變化pH值有一定變化，主要是由于其解離出來的酸分子影響乳酸菌產(chǎn)乳酸的代謝途徑，使其產(chǎn)酸的酶活受到一定影響，所以其發(fā)酵液的pH值較對(duì)照高。0.1%和0.2%的山梨酸鉀添加對(duì)乳酸菌基本無影響，0.3%和0.4%的山梨酸鉀添加對(duì)乳酸菌活性有較小的影響。
山梨酸鉀是一種常用的防霉劑，由于其安全和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，廣泛應(yīng)用于食品、飼料等行業(yè)。但是山梨酸鉀由于其使用要在酸性條件下才能發(fā)揮比較好的抑制霉菌的作用，所以其使用存在一定的局限性。本文章通過研究發(fā)現(xiàn)添加0.2%山梨酸鉀對(duì)乳酸菌活性基本無影響，但是對(duì)霉菌卻有比較好的抑制效果。
[1]王麗娜，周盛昌等.防霉劑和脫霉劑在飼料中的應(yīng)用[J].今日養(yǎng)豬業(yè)，2019（05）：100- 101.
[2]張乃茹,李曉莉.食品防腐劑山梨酸的研究進(jìn)展[J].長(zhǎng)春師范學(xué)院學(xué)報(bào),1995(05):16-19+3.
丁文慧,陸利霞,熊曉輝.提高山梨酸及鉀鹽防腐效果的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技,2012,33(03):410-412+416.